<menuitem id="fpwxb"></menuitem><bdo id="fpwxb"><dfn id="fpwxb"></dfn></bdo>
      <track id="fpwxb"><div id="fpwxb"></div></track>

      1. 搜索
        中文名稱

        雞心乳酸脫氫酶(L-LDH)

        所屬分類
        數量
        -
        +
        沒有此類產品
        我要詢價
        產品描述
        產品參數
        英文名稱
        L-Lactate dehydrogenase
        縮寫
        L-LDH
        貨號
        AA0094B
        規格
        規格可定制

         

        一、產品介紹

        外觀:

        白色無定形粉末。

        凍干緩沖液:

        50mM PB-K,1mg/ml BSA,pH7.0

        比  活  力:

        ≥70U/mg干粉(乳酸底物法);≥100U/mg干粉(丙酮酸底物法)。

        穩  定  性:

        干粉于-20至少穩定一年。

        分  子  量:

        ~38kD (SDS-PAGE)

        等  電  點:

        7.89

        pH穩定性 :

        4.010.0穩定 (500-1000U/L,25,24hr)              Figure 1      

        最  適pH

        10.0-11.0 (乳酸底物法, Figure 4);7.0~8.0 (丙酮酸底物法, Figure 5)                         

        最適溫度 

        60                                         Figure 2 and 6

        熱穩定性 

        1kU/L60加熱30min不失活(乳酸底物法)。        Figure 3

        穩  定  劑:

        添加≥1mg/ml BSA有助于稀釋樣品的穩定。

              溶:

        用去離子水或50mM PB-K (pH 7.0) 復溶。

         

         

         

         

         

         

         

         

         

        二、乳酸底物法測定酶活

        2.1 測定原理

        在強堿性條件下,雞心L-LDH催化L-乳酸與NAD+反應生成丙酮酸和NADH。在一定范圍內NADH的生成速率與L-LDH活力成正比。在340nm處測定NADH的生成速率,根據酶活計算公式即可測出酶活力。1個酶活單位(U)等于在下述反應條件下每分鐘生成1微摩爾NADH所需的酶量。

        2.2   檢測方法

        1.     酶稀釋液:50mM PB-K,1mg/ml BSA,0.1% NaN3,pH7.0。過0.22um濾膜后2-8保存,保質期1年。

        2.     Buffer350mM CAPSMr=221.32),0.1% NaN3,pH10.0 (25),過0.22um濾膜后2-8保存,保質期一個月。

        3.     R11M 乳酸鋰,0.1% NaN3。過0.22um濾膜后2-8保存,保質期一個月。

        4.     R29mM NAD ,0.1% NaN3。過0.22um濾膜后2-8保存,保質期為一周。

        1.     R臨用前按Buffer : R1 : R2=920ul : 80ul : 200ul比例混合,2-8保存,保質期1天。用前恢復室溫。

        2.     待測酶液S稱量所需的酶粉,用去離子水或50mM PB-K (pH 7.0)復溶,定容到既定體積配制成待測酶液S。用酶稀釋液將其稀釋至200-2000U/L內的2-5個梯度。

        3.     酶活檢測步驟

         

        1)   1200ulR添加至“d=1.0cm”的石英比色皿中,37℃溫育1min;然后加入20ul待測酶液 S,充分混勻后,37℃反應至3min;記錄第2-3minOD340的變化,并計算每分鐘吸光值變化率(△As/min)。測活歷程如下:

         

        2)   重復以上步驟,用20μl酶稀釋液作為陰性對照。記錄空白吸光值(△Ab/min)。

        1.     計算公式


         

         

        Vt

        :反應液總體積(ml

        ε

        NADH摩爾吸光系數6.22cm2/micromole

        Vs

        :樣品體積(ml

        d

        :比色杯光程(1cm

        D

        :稀釋倍數

        A/min

        △As/min-△Ab/min

        方向

        :升反應

        線性

        0-2000U/L,建議稀釋至200-2000U/L。

        2.3 酶性質附圖(乳酸底物法)

         

        三、丙酮酸底物法測定酶活                

        3.1  測定原理

         

        在中性偏堿條件下,雞心L-LDH催化丙酮酸和NADH反應生成L-乳酸與NAD+。在一定范圍內NADH的消耗速率與L-LDH活力成正比。在340nm處測定NADH的消耗速率,根據酶活計算公式即可測出酶活力。1個酶活單位(U)等于在下述反應條件下每分鐘消耗1微摩爾 NADH所需的酶量。

        3.1  檢測方法

        1.     Buffer100mM PB-K,pH7.0。

        2.     酶稀釋液:50mM PB-K,1mg/ml BSA,0.1%NaN3,pH7.0。過0.22um濾膜后2-8保存,保質期1年。

        3.     R1100mM PB-K,25.4mM丙酮酸鈉鹽或鉀鹽,0.1%NaN3,pH7.0。過0.22um濾膜后2-8保存,保質期一個月。

        4.     R210mM Tris-HCl, 10mg/ml NADH,0.1%NaN3,pH9.7,過0.22um濾膜后2-8保存,保質期1周。

        5.     R臨用前按Buffer : R1 : R2=3000ul : 100ul : 50ul比例混合,2-8保存,保質期1天。用前恢復室溫當OD340<0.8時,重新配置R。若OD340依然小于0.8,請重新配置R2。

        6.     待測酶液S稱量所需的酶粉,用去離子水或50mM PB-K (pH 7.0)復溶,定容到既定體積配制成待測酶液S。用酶稀釋液將其稀釋至500-3000U/L范圍內的2-5個梯度。

        7.     酶活檢測步驟

         

        1)   1200ulR添加至“d=1.0cm”的石英比色皿中,37℃溫育1min;然后加入20ul待測酶液 S,充分混勻后,37℃反應至3min;記錄第2-3minOD340的變化,并計算每分鐘吸光值變化率(△As/min)。測活歷程如下:

         

        2)   重復以上步驟,用20μl酶稀釋液作為陰性對照。記錄空白吸光值(△Ab/min)。

         

        8.     計算公式

                

         

        Vt

        :反應液總體積(ml

        ε

        NADH摩爾吸光系數6.22cm2/micromole

        Vs

        :樣品體積(ml

        d

        :比色杯光程(1cm

        D

        :稀釋倍數

        A/min

        △As/min-△Ab/min

        方向

        :降反應

        線性

        0-3000U/L,建議稀釋至500-3000U/L。

        3.3 酶性質附圖(丙酮酸底物法)

        未找到相應參數組,請于后臺屬性模板中添加
        暫未實現,敬請期待
        暫未實現,敬請期待
        關鍵詞
        上一篇
        下一篇

        IVD原料

        本色成免费视频在线观看免费_日韩高清免费视频_国产精品日韩一区_无码国模国产在线观看中文

            <menuitem id="fpwxb"></menuitem><bdo id="fpwxb"><dfn id="fpwxb"></dfn></bdo>
            <track id="fpwxb"><div id="fpwxb"></div></track>